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- Title
Estudo de genes diferencialmente expressos em Leishmania infantum para compreensão do mecanismo de ação do antileishmanial furoxano 14e.
- Authors
Lopes Teodoro, Daphne Duberger; Braga Imamura, Kely; de Almeida, Letícia; Gaban Passalacqua, Thaís; Graminha, Márcia A. S.
- Abstract
Introdução: As doenças parasitárias atingem diversas pessoas por todo o mundo, principalmente em países subdesenvolvidos e dentre elas, destacam-se as leishmanioses, com incidência anual de 2 milhões de casos e 350 milhões de pessoas vivendo em áreas sob risco de contrair esta doença. Os fármacos atualmente utilizados no tratamento desta parasitose são tóxicos e pouco eficazes, tornando importantes pesquisas para propor novos fármacos. Neste contexto, nosso grupo de pesquisa em colaboração com o LAPDESF da FCF- UNESP de Araraquara sintetizou e caracterizou derivados furoxanos com importantes propriedades antiparasitárias, eficazes na eliminação de L. infantum em hamsters infectados com L. infantum. Esta atividade parece estar associada com a inibição da enzima cisteíno protease do parasito e pela liberação de óxido nítrico (NO). Dados proteômicos obtidos após exposição de formas promastigotas do parasito ao composto 14e, revelaram algumas proteínas diferencialmente expressas, incluindo aquelas envolvidas na detoxificação do parasito a Espécies Reativas de Oxigênio (EROs/ Nitrogênio (ERNs). Objetivo: Avaliar a expressão diferencial de genes de L. infantum quando expostos ao derivado furoxano 14e. Metodologia: Empregou-se o método ΔΔCT nos ensaios de PCR em Tempo Real quantitativo (qPCR). Para isso, foram desenhados primers para as regiões gênicas codificadoras das proteínas superexpressas (ATP sintase, Calmodulina, Calpaina, Calrreticulina, Chaperoninas HSP60 e HSP70, Citocromo C oxidase subunidade IV, Peroxidoxina, Tioredoxina) seguido de análise dos parâmetros slope, R2, eficiência e curva de melting paratodas as curvas de eficiência dos primers. Posteriormente, os primers foram utilizados na metodologia ΔΔCT para os grupos experimentais correspondentes a promastigotas de L. infantum cultivadas na presença ou ausência de 14e. Resultados e discussão: Para cada par de primer analisado, verificou-se que os valores obtidos para os parâmetros R2 (0,9 ≥ 1), slope (-3,3 ≥ -3,5), eficiência (90% ≥ 110%) estão adequados para prosseguimento da validação dos dados proteômicos. A determinação da curva de melting destes primers também sugere ausência de formação de dímeros ou hairpin. A análise de qPCR utilizando o método ΔΔCT, obteve como resultado que proteínas que se mostraram superexpressas na proteômica tiveram os níveis de expressão proteica correlacionados com os níveis de expressão na fase transcricional. Conclusão: Os primers desenhados para análise de expressão dos genes em estudo estão adequados experimentalmente para a análise. Após 72 horas de tratamento com o antileishmanial 14e houve alteração no nível transcricional de algumas proteínas envolvidas na detoxificação de EROs/ERNs e em funções de organelas como o retículo endoplasmáticoe mitocôndriacomo uma possível forma da Leishmania tentar reverter os efeitos gerados pelo 14e.
- Publication
Revista de Ciências Farmacêuticas Básica e Aplicada, 2018, Vol 39, p2
- ISSN
1808-4532
- Publication type
Article