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- Title
Respuesta de fibroblastos gingivales humanos en cultivo con una enterobacteria aislada de bolsa periodontal.
- Authors
Castro, M. C.
- Abstract
Antecedentes: la enfermedad periodontal es quizás una de las enfermedades crónicas infecciosas más frecuentes en los seres humanos. Las bacterias implicadas en su etiología han sido plenamente identificadas y se ha encontrado un patrón común en el componente bacteriano de los pacientes con periodontitis En los últimos años, se ha resaltado la importancia de la presencia de bacilos entéricos en las muestras de placa subgingival de estos pacientes. Ante la evidencia experimental que sustenta que las células eucariotas al entrar en contacto con patógenos periodontales pueden desencadenar mecanismos de penetración, necrosis y apoptosis celular, es importante hacer estudios de viabilidad celular que permitan evaluar la supervivencia del fibroblasto al ser cultivado con una enterobacteria como Escherichia coli (E. coli) teniendo en cuenta los reportes de su aislamiento junto con otras enterobacterias a partir de bolsas periodontales de pacientes con periodontitis crónica. Objetivo: determinar in vitro la respuesta de los fibroblastos gingivales, después de su cultivo con un inóculo de una bacteria entérica, E. coli aislada de paciente con enfermedad periodontal. Métodos: la determinación de la infección de fibroblastos gingivales humanos por parte de aislamientos de E. coli de bolsas periodontales se llevó a cabo sobre monocapas de fibroblastos con 70 % de confluencia de aproximadamente 700.000 células por pozo con una suspensión bacteriana de 4 x 107 bacterias/ml. Todos los ensayos se realizaron por duplicado con una MOI de 50 bacterias por célula. Para el análisis por citometría de flujo, el citómetro fue ajustado con una muestra sin marcar (fibroblastos resuspendidos en buffer) y se tuvieron como controles tres tubos: uno con células suspendidas en DMEM más H2O2 (control positivo), otro con células y anexina y un tercero con células y 7AAD. Se excluyeron para el análisis detritus, bacterias que no se unieron y restos celulares, y se observó que las células no tratadas (células blanco) eran anexina V-PE y 7ADD negativo, indicando que eran viables y no sufrieron apoptosis. Resultados: la alteración en la viabilidad de los fibroblastos se apreció después de dos horas de interacción de las células con las bacterias, demostrada por la siembra en placa y recuento de células viables. Posterior al cocultivo de las células con E. coli se apreció muerte bacteriana después de la adición del antibiótico y una incubación adicional de 60 minutos. Conclusiones: este trabajo es el primero en mostrar in vitro la capacidad de alteración de la viabilidad de los fibroblastos gingivales al ser infectados con un inóculo de una enterobacteria proveniente de una bolsa periodontal. Los resultados de esta investigación sugieren que la presencia de enterobacterias en pacientes con enfermedad periodontal puede ser un factor que debe ser considerado para entender el posible rol que cumplen las enterobacterias en la patogénesis de la enfermedad periodontal en humanos, a pesar que su presencia en la cavidad oral ha sido considerada más un fenómeno epidemiológico que patológico.
- Publication
Universitas Odontológica, 2014, Vol 33, Issue 71, p232
- ISSN
0120-4319
- Publication type
Article