We found a match
Your institution may have access to this item. Find your institution then sign in to continue.
- Title
Functional properties of the native type 3 ryanodine receptor Ca[sup 2+] -release channel from canine diaphragm.
- Authors
Rousseau, Eric; Proteau, Sonia
- Abstract
mRNA and protein analyses have previously shown that the diaphragm expresses two ryanodine receptor isoforms: RyR1 and RyR3.RyR1 is the main Ca[sup 2+] -releasing pathway in this muscle type. We now report the conducting, gating, and immunological properties of the native and purified forms of the less abundant RyR3 channel. The conductance of this native Ca[sup 2+] -release channel was 330 pS in 50 mM/250 mM trans/cis CsCH[sub 3] SO[sub 3] . It was activated by Ca[sup 2+] concentrations of 1-1000 µM, and did not inactivate at mM concentrations of Ca[sup 2+] . Both isoforms were purified by either a sucrose density gradient or immunoprecipitation as > 450 kDa proteins on SDS-PAGE. Western blot analysis confirmed the presence of RyR1 and RyR3, which displayed conductances of 740 ± 30 and 800 ± 25 pS, respectively, in 250 mM KCl. We thus provide evidence that one form of the diaphragm SR Ca[sup 2+] -release channels may be classified as RyR3, with gating properties different from those of the well-characterized RyR1 and RyR2 isoforms.Key words: diaphragm, calcium channel, ryanodine receptors, skeletal muscles, excitation-contraction coupling.Les analyses génétiques et biochimiques du diaphragme des rongeurs ont montré que ces cellules musculaires expriment deux types de récepteur à la ryanodine soit les isoformes RyR1 et RyR3. Dans ce muscle vital, RyR1 est l'isoforme du RS principalement responsable de la libération calcique, dépendante du voltage. Ce travail rapporte les propriétés biophysiques et immunologiques de l'isoforme de type RyR3, native, purifiée et reconstituée, qui est peu abondante et dont le rôle reste à clarifier. La conductance de ce canal Ca[sup 2+] du RS natif, mesurée en condition asymétrique (50/250 mM trans/cis) de CsCH[sub 3] SO[sub 3,] est de 330 pS. Ces Canaux sont activés par 1 à 1000 µM de [Ca[sup 2+] ] libre et ne s'inactivent pas à haute [Ca[sup 2+] ] (mM). Les deux isoformes, purifiées sur gradient de sucrose ou par immuno-précipitation, ont des Mr de l'ordre de 450 kDa sur SDS-PAGE. L'analyse immunologique atteste de la présence des 2 isoformes RyR1 et RyR3 qui ont des conductances unitaires respective de 740 ± 30 pS et 800 ± 25 pS en 250 mM KCl. Nos résultats confirment donc que l'un des canaux Ca[sup 2+] du RS du diaphragme canin, est de type RyR3 et que ses propriétés sont différentes de celles des isoformes RyR1 et RyR2 (cardiaque).Mots clés : diaphragme, canal calcique, récepteurs à la ryanodine, muscles squelettiques, couplage excitation- contraction.
- Subjects
RYANODINE; INSECTICIDES; ALKALOIDS; MESSENGER RNA; PROTEINS
- Publication
Canadian Journal of Physiology & Pharmacology, 2001, Vol 79, Issue 4, p310
- ISSN
0008-4212
- Publication type
Article
- DOI
10.1139/y00-127