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- Title
Proteintemplat-gesteuerte Bildung eines Inhibitors des Koagulationsfaktors Xa durch eine Amidierung ohne Hintergrundreaktion.
- Authors
Jaegle, Mike; Steinmetzer, Torsten; Rademann, Jörg
- Abstract
Proteintemplat‐gesteuerte Reaktionen ermöglichen eine “Ziel‐geleitete Synthese” von Proteinliganden ausgehend von reaktiven Fragmenten – im Idealfall ohne jegliche Hintergrundreaktion. Hier wird die Templat‐unterstützte Bildung von Amiden untersucht. Ein nukleophiles Fragment, das an Koagulationsfaktor Xa bindet, wurde mit dem Protein und 13 unterschiedlich aktivierten Dipeptiden inkubiert. Das Protein induzierte eine nicht‐katalytische Templat‐unterstützte Reaktion des Phenyl‐ und Trifluorethylesters; für Letzteren konnte eine vollständig Hintergrund‐freie Amidierung nachgewiesen werden. Ausgehend von zwei Startfragmenten mit mm Affinität wurde ein 29 nm superadditiver Inhibitor gebildet. Die Fragmentligation wurde mit hoher Empfindlichkeit über einen Enzymaktivitätsassay und Massenspektrometrie detektiert. Der Reaktionsfortschritt und die Autoinhibierung der Templat‐gesteuerten Reaktion durch das gebildete Ligationsprodukt wurden bestimmt, und die Struktur des Protein‐Inhibitor‐Komplexes wurde aufgeklärt. Ein Protein bildet seinen eigenen Mörder: Koagulationsfaktor Xa induziert die Verknüpfung zweier schwach bindender Fragmente zu einem hochpotenten, superadditiven Inhibitor unter Bildung einer Amidbindung (siehe Schema; gelb: aktiviertes Carbonsäurederivat, grün: nukleophiles Aminfragment). Geeignete Aktivester reagieren auf der Proteinoberfläche über einen nicht‐katalytischen, auto‐inhibierten Mechanismus ohne Auftreten einer Hintergrundreaktion in freier Lösung.
- Publication
Angewandte Chemie, 2017, Vol 129, Issue 13, p3772
- ISSN
0044-8249
- Publication type
Article
- DOI
10.1002/ange.201611547