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- Title
BB. Identificação e predição de epítopos da toxina botulínica tipo A.
- Authors
Paulino Luiz, Gabriel; Ívens Fagundes, Mírian; Scussel, Rahisa; Coral Galvani, Nathalia; Barros Fernandes, Bruna; De Costa Constante, Franciane; Andrez Machado-de-Ávila, Ricardo
- Abstract
Introdução: A utilização de neurotoxinas na prática clínica é crescente, sendo um grande representante deste setor a toxina botulínica tipo A (BoNT/A), que atua bloqueando a contração muscular. Uma problemática emergente do uso deste tratamento são os casos de resistência a ação terapêutica em virtude da produção de anticorpos neutralizantes, sobretudo em intervenções de longa duração e que necessitam de altas dosagens. Objetivo: Este trabalho visa identificar, sintetizar e avaliar possíveis epítopos da proteína BoNT/A. Metodologia: Foram realizadas imunizações em camundongos Swiss utilizando a BoNT/A da marca Botox® como imunógeno. Uma semana após a sétima imunização, os soros foram coletados e a reatividade foi quantificada por ELISA. A técnica de SPOT foi realizada para identificação dos epítopos da BoNT/A utilizando os anticorpos anti-BoNT/A adquiridos na imunização dos camundongos. A membrana de celulose foi preparada com 1.295 aminoácidos com peptídeos de 15 aminoácidos sobrepostos a cada 12 aminoácidos correspondendo à sequência proteica da BoNT/A. Para quantificar a reatividade dos spots, foi utilizado o software Image J, que quantifica a intensidade de pixels em cada spot. As sequências mais reativas identificadas pelo SPOT foram localizadas na estrutura 3D da BoNT/A utilizando o Swiss-PDB Viewer. Para avaliar a acessibilidade foi utilizado o módulo Multiple Structure Single Parameter (MSSP) disponibilizado online no website BlueStar STING. Para análise de validação, o programa de identificação in silico ABCPred foi utilizado na predição de epítopos de células B. Resultados e discussão: Pelo ensaio de ELISA foi possível confirmar a produção de anticorpos anti-BoNT/A com o protocolo de imunização dos camundongos. A reatividade inespecífica do soro pré-imune foi observada com os spots 903, 904 e 905. Já a reatividade específica com o soro pós-imune anti-BoNT/A foi mais intensa nos spots 861, 937, 938, 940, 1095, 1096, 1112 e 1113. Na análise de bioinformática, foi possível verificar a disposição espacial das sequências identificadas em quatro regiões da proteína e validálas como regiões acessíveis pelo software MSSP. Os spots 937, 938 e 940 mostraram ter alta acessibilidade, destacando os resíduos de aminoácidos K562 e R564 como os mais acessíveis de toda proteína. Como validação dos resultados obtidos pela técnica de SPOT, o ABCPred identificou que todos os spots identificados apresentaram altas taxas de serem um epítopo de células B. Conclusão: Através desse estudo foi possível concluir que existem quatro regiões antigênicas para a produção de uma resposta de células B contra a BoNT/A. Os peptídeos correspondentes aos spots 937, 938 e 940; e 1112 e 1113 foram os que produziram maior título de anticorpos específicos contra a BoNT/A.
- Publication
Revista de Ciências Farmacêuticas Básica e Aplicada, 2021, Vol 42, p9
- ISSN
1808-4532
- Publication type
Article